军团菌致病性检测方法

军团病(LD)第一次大规模爆发在1976年在费城一个军事集会,造成34人死亡。自那时以来,有次疫情或零星的退伍军人的传播疾病在社区,在医院,在旅行。军团菌是一种兼性胞内革兰氏阴性杆菌,广泛存在于水、土壤、人工水系统和其他环境,主要是发现在人工水环境。军团菌主要存在于冷水,但近年来,军团菌从热水经常孤立系统。嗜肺性军团菌(LP)的主要菌株的军团菌导致军团病。军团菌监测环境中有效地检测其致病能力对保护公众健康和减少损失具有重要意义。

分子生物学方法

有多个嗜肺性军团菌毒力基因,包括mip、爱尔兰共和军,lvr, ot, icm, cpx, rtxA lvh。Mip-encoded蛋白质可以抵抗细胞内杀死对哺乳动物和原生动物吞噬细胞;cpxRA调节效应蛋白的分泌的要素类型IVB分泌司长委任制度;iraA位点的甲基转移酶编码需要细菌细胞内感染的假想iron-peptide运输车编码iraB轨迹可以参与high-valent铁的吸收通过iron-loaded肽;lvr基因负责lvh的规定家庭分泌蛋白;rtxA编码蛋白质粘附、细胞毒性和孔隙的形成。Lvh编码一种蛋白质来自IVA分泌系统,这有助于结合毒性;点/ icm编码一种蛋白质来自IVB分泌系统,司长委任负责军团菌在宿主细胞的复制。毒性基因DNA不同地区存在致病菌的基因组,但没有出现在相同或相关的非致病性菌株。军团菌的致病性密切相关,其毒性和致病性决定根据病原毒力基因的扩增结果。聚合酶链反应(PCR)是一种分子生物学技术用于放大目标核酸序列,和目标基因内被放大放大几百万倍2到3小时。反应后,放大产品被琼脂糖凝胶电泳分离,结果是积极的,也就是说,确认该基因的存在。虽然模板核酸提取的质量不高,可能出现假阴性的结果,该方法特异性强,灵敏度高,是其他分子生物学实验的基础。

此外,pcr进行军团菌致病性检测方法包括多位点可变数目串联重复序列分析来检测毒性基因型,micro-DNA微阵列检测军团菌毒力基因,利用基因标记来识别军团菌临床和环境条件。

Immunology-based化验

ELISA

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一个简单和快速的技术检测和量化的抗体或抗原附着在固体表面。酶的底物添加产生颜色变化或光信号与抗原呈现在原始的样本的数量。因此,样品中抗原的总量可以计算基于颜色的强度直接关系或化学信号和样品中抗原量的数量或浓度。该方法操作简单,灵敏度高。然而,该方法具有较高的要求技术人员操作。此外,重组抗原用于方法,特异性不高和假阳性结果可能会发生。退伍军人的发病机制的一个关键特性是中性粒细胞在肺的迅速涌入,IL-1α是中性粒细胞招募到肺部的主要发起者l . pneumophila-infected老鼠。研究人员用这种技术来检测的数量IL-1α释放嗜肺性军团菌感染小鼠,发现中性粒细胞招募在应对毒性嗜肺性军团菌,并确定IL-1α释放的数量之间的关系和应变。

免疫印迹

免疫印迹方法是基于抗原抗体的特异性结合蛋白。混合抗原样品由一维或二维电泳凝胶板,和抗原成分的凝胶转移到吸墨纸自然吸附力下的吸水纸或其他外部力量,然后固定矩阵膜结合吸墨纸。然后,antigen-immobilized矩阵膜被基质开发和放射自显影法检测和分析。免疫印迹分析很简单,省时省力,并可同时识别多个蛋白质。先前的研究已经发现,鞭毛及其分泌的蛋白质有助于运动,主人发现,生物膜殖民和退伍军人的毒性。细菌毒力可以由退伍军人检测鞭毛及其分泌的蛋白质。

LDH细胞毒性试验

乳酸脱氢酶(LDH)是一种稳定的蛋白质,存在于正常细胞的细胞质中。当细胞膜受损,LDH释放细胞外。有一个很好的相关性LDH的细胞毒性和动物死亡率和人类的血药浓度死亡。LDH的细胞毒性检测工具可以用来检测细胞上清液中LDH的活性在500 nm标来确定细胞损伤的程度,从而实现检测军团菌的毒性。这个试验是敏感、操作简单和准确;然而,细胞毒性的评估是基于量化的细胞损伤,这是必要的,以确定最优数量的细胞。