一切你想了解限制性内切酶

如果没有限制性内切酶,今天将是分子生物学研究的发展?40年来,限制性内切酶,在幕后工作,已经悄悄地提拔了许多基本的生物学研究和商业应用。限制内切酶(也称为限制性内切酶)第一次发现细菌,但后来他们还发现在一些古生菌。通常情况下,限制性内切酶双链DNA。每个限制性内切核酸酶将识别一个特定的DNA序列。根据DNA酶的类型,可以减少在识别序列或不远的识别序列。识别序列的长度通常是4 - 8 bp,消化后,粘结束(5 ' 3 'overhangs)和钝结束将会形成。今天,约4000限制性内切酶已确定,其中600多是商用。

限制性内切酶的历史
在1950年代早期,许多研究小组观察到的差异对不同细菌噬菌体宿主菌株的感染效率相同的物种。直到1960年代,人们发现主机控制变异的机制,与消化有关噬菌体的DNA,然后发现孤立的限制性内切酶。与限制性内切酶的开创性研究,汉密尔顿史密斯和丹尼尔·内森沃纳乔木共同获得了1978年诺贝尔生理学或医学奖。发现DNA连接酶(一种DNA修饰酶)和增长家庭特定场地的限制内切酶、DNA重组技术出现了。

限制性内切酶的命名规则
这种命名规则考虑核酸内切酶的来源的三个特征:属名、种名和应变或血清型。他们联合起来,组成一个短名称,紧随其后的是罗马数字,代表多个限制性内切酶从相同的压力。例如,HindIII(或后三世之前根据命名约定)代表:

“H”代表嗜血杆菌
“在”代表流感嗜血杆菌
“D”代表血清型D
“三世”是用来区分其他限制性内切酶Haemophilusinfluenza血清型d(例如,HindII和HindIII)。

限制性内切酶的分类
根据结构的复杂性,识别序列,裂解位点的位置和代数余子式需求,限制内切酶分为四类:第一类,二类,类型III和IV型。

1。功能类型的我:
一)multi-subunit蛋白质限制和甲基化活动。
b)它需要ATP。
c)减少识别网站和网站之间的距离是可变的。

2。II型的特点:
具体的识别序列
b)裂解位点位于或毗邻识别序列
c)它生成磷酸5′和3′羟基末端裂解位点
它需要Mg2 + d)

3所示。类型III的特性
),它由两个相反的方向识别序列
b)之间的距离裂解位点的识别序列是恒定的
c)需要大量的ATP

4所示。IV型的特点
)它只削减DNA甲基化
b)切割网站大约30 bp远离识别网站

特异性识别的站点和乳沟
另一个重要的分类方法和比较限制性内切酶是isoschizomer heteroschizomer。

Isoschizomers与相同的限制内切酶识别序列和相同的特异性。例如,AgeI和BshT1可以识别和减少5”——↓CCGGT-3”通过相同的地图。然而,一系列isoschizomers首选网站可能有分歧,反应条件下,甲基化敏感性和明星的活动。

Heterochlease可以识别相同的核苷酸序列,但是将DNA在不同的网站。例如,SmaI (5“ccc↓GGG-3”)和XmaI (5’- c↓CCGGG-3”)可以识别5“-CCCGGG-3”。然而,切割方法不同,导致不同类型的结束(在这种情况下,SmaI产生钝结束,XmaI生产5′凸结束)。

的差异使得限制内切酶识别序列和乳沟地图非常灵活且强大的工具来识别和操纵遗传物质。

创意酶关注开发高效酶工具来支持你的研究。综合目录克隆和限制性内切酶可以降低分子生物学过程的时间框架。DNA标记和梯子提供最好的标准建设的结果。目前,最流行的创意提供的分子工具酶酶包括AluB我Bgl II, Bme18我Kzo9我Lmn我,马伯我等。